细胞传代的一般方法?
开始细胞传代前,仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全:一般主要有:细胞(单层细胞,镜检适合)、培养液(mem-0.2%lh 培养液或mem 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血x清、庆大溶液(1 万单位)、7.5%nahc03 溶液、0.25%胰蛋白酶、pbs 洗液。
用具:小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1)、细胞吹打管(20 ml)(以上用具需经121℃至
少15 分钟高压灭菌)、c02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰箱
操作步骤:镜检细胞,挑选生长状态---,细胞界限清晰,rccs-h,具有立体感,形态好无污染、无异常及可x疑病变细胞。配制细胞培养液:按以下配比配制mem-0.2%lh 培养液100ml 内,加入灭活小牛血x清10m1,庆大溶液0.3m1,7.5%碳---钠溶液3ml。(仅供一般参考)。---细胞;先用pbs 洗液冲洗细胞表面1-2 次,每次10m1,弃去洗液,向细胞瓶内加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,细胞瓶平放,使---液完全覆盖细胞表面。至细胞完全脱落到胰酶中。每瓶加入10m1 细胞培养液吹打分散细胞,rccs-3d,按所需的传
原代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大,是检测---的实验对象,永生化细胞株也是从原代1开始的,但导入了---增殖基因等,跟原代是不同的,而且“50代(大概的)以前的细胞和之后的细胞比较,之后的遗传物质已经改变,rccs,并不再具有接触生长抑制现象。这些细胞带有ai变细胞的特点“。在养原代细胞和永生性细胞株的过程中发现,永生细胞株形态及整理状态不如原代,但可以相对长时间传代,而原代有代数---,这是永生细胞株的一大优势。原代细胞具有着可持续传代;生物性状发生变化;仍保留亲体组织的遗传特征;接近和反映体内生理特征等优势。
rccs?的应用
(在模拟的微重力环境下,细胞/组织的三维高分化的培养技术已进入---和生产)
组织移植:例如rccs培养的肝组织和自然的在整体上无区别,使局部组织移植成为可能。
疫1苗生产:以前丙肝疫1苗效果不佳的原因之一是用来产生这种疫1苗的---并不长在人的肝1脏中,现在rccs培养的肝使产生肝1炎疫1苗的---生长在人的肝1脏成为现实。rccs在美国已广泛用于生产。
再生:经培养的密度---,可治1疗关节损伤。
激1素、酶和其它由人体组织产生的蛋白以及基因工程:经培养的高分化的人体组织,其被---后能分泌治1疗用的蛋白。例如经培养的神经组织产生的神经生长激1素能修复脊椎的损伤。
骨1髓再生:培养的骨1髓生长情况,且可连续进行和低温冷冻保藏,可建大型骨1髓库。
糖1尿病:胰1岛素培养后能插入体内继续生长,------有望免去长期注射胰1岛素。
有效杀灭肿1瘤:对肿1瘤组织取样,与自身的白细胞或淋巴细胞在rccs中混合培养,---或驯化它们来识别和攻击肿1瘤组织,然后把经驯化后有---力的细胞直接注入---。这样,这些经感化的淋巴细胞---杀灭了肿1瘤。
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