细胞传代的一般方法?
开始细胞传代前,仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全:一般主要有:细胞(单层细胞,镜检适合)、培养液(mem-0.2%lh 培养液或mem 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血x清、庆大溶液(1 万单位)、7.5%nahc03 溶液、0.25%胰蛋白酶、pbs 洗液。
用具:小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1)、细胞吹打管(20 ml)(以上用具需经121℃至
少15 分钟高压灭菌)、c02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰箱
操作步骤:镜检细胞,挑选生长状态---,细胞界限清晰,具有立体感,形态好无污染、无异常及可x疑病变细胞。配制细胞培养液:按以下配比配制mem-0.2%lh 培养液100ml 内,加入灭活小牛血x清10m1,维修rccs-h,庆大溶液0.3m1,7.5%碳---钠溶液3ml。(仅供一般参考)。---细胞;先用pbs 洗液冲洗细胞表面1-2 次,每次10m1,维修rccs-4h,弃去洗液,向细胞瓶内加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,细胞瓶平放,使---液完全覆盖细胞表面。至细胞完全脱落到胰酶中。每瓶加入10m1 细胞培养液吹打分散细胞,按所需的传
凡是来源于胚胎、组织器1官及外周血,经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。1悬浮细胞的分离方法组织材料若来自---、羊水、胸水或的悬液材料,简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层,这样可根据需要收获目的细胞。2实体组织材料的分离方法对于实体组织材料,由于细胞间结合紧密,为了使组织中的细胞充分分散,形成细胞悬液,可采用机械分散法(物理裂解)和---分离法。
---检测技术
目前主要有两种用于检测---能力的方法。一种是直接的方法,维修rccs-d,通过直接测定进行分裂
的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法,即细胞活力(cell viability)检测方法,通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然,天津市维修rccs,细胞活力检测法并不能终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序,但的干扰可抑制凋亡的发生;这时若采用细胞活力检测法,显然可以区分两种条件下的细胞数量,但我们并不能从干扰组细胞数大于对照组的事实说明可促进---的结论。所以直接的证据应该采用方法一。
其中常见检测:cck8检测法 ,mtt检测法,brdu检测法,edu检测法,平板克x隆形成。
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