rccmax-细胞三维培养-灌注培养基rccmax

细胞传代的一般方法？

       开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全：一般主要有：细胞(单层细胞，镜检适合)、培养液(mem-0.2%lh 培养液或mem 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血x清、庆大溶液（1 万单位）、7.5％nahc03 溶液、0.25％胰蛋白酶、pbs 洗液。

      用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1）、细胞吹打管（20 ml）(以上用具需经121℃至

少15 分钟高压灭菌)、c02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰箱

      操作步骤：镜检细胞，挑选生长状态---，细胞界限清晰，具有立体感，形态好无污染、无异常及可x疑病变细胞。配制细胞培养液：按以下配比配制mem-0.2%lh 培养液100ml 内，rccmax，加入灭活小牛血x清10m1，庆大溶液0.3m1，7.5%碳---钠溶液3ml。（仅供一般参考）。---细胞；先用pbs 洗液冲洗细胞表面1-2 次，rccmax灌流培养基，每次10m1，灌注培养基rccmax，弃去洗液，向细胞瓶内加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，细胞瓶平放，使---液完全覆盖细胞表面。至细胞完全脱落到胰酶中。每瓶加入10m1 细胞培养液吹打分散细胞，按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装，然后补加至所需培养量。加塞，置于37±1℃孵箱培养。约2～4 天成片。(由细胞接种浓度决定)；填写传代记录。

       三维细胞培养技术是介于单层细胞培养与动物实验之间的一种技术，既能1大程度的模拟体内环境，又能展现细胞培养的直观性及条件可控性的优势。

1、肿1瘤生物学：肿1瘤的实验性治1疗、肿1瘤的侵袭性、转移和中心坏死的机制、肿1瘤的血管形成和营养供给、体内基因表达、测试对肿1瘤生长和向邻近组织转移的抑制效果的模拟等方面。

2、和骨组织：成熟的细胞和被广泛用于三维细胞培养，以再生损伤的、骨、韧带、肌腱和膝关节半月板。

3、循环系统和---：在成熟的组织中及时产生血管网络是组织工程的重要课题；在治1疗领域， 所关心的也是如何有目的地改变血管形成，以抑制肿1瘤的进展。

4、神经系统：培植单一神经元成为多细胞---体、活标本切片后测试神经元电势、神经培养治1疗老年chi呆症、帕金1森病等。